低温研磨样品能够有效抑制---降解、保留蛋白质活性。
·分析药的成分
药的有效成分的异构体之间常常存在重大区别。低温研磨可预防分子因压力和受热而降解。
·减少样品挥发
低温研磨能---减少样品的挥发,更完整保留样品成分含量
·研磨韧性/硬性样品
对于高韧塑料、高强塑料、树脂等难研磨样品,低温研磨可---提高研磨效果及效率
每50~100mg 组织加入0.2体积 trizol
1.加钢球1颗,设置研磨仪参数:12单位振频,1min,每种样品基本充分匀浆
2. 将上述匀浆液每0.2体积 trizol 试剂用量的匀浆液中加入0.04体积氯方,盖紧管盖,手动剧烈震摇15 秒钟,然后室温静置2~3 分钟。
3. 4℃ 10,000g 离心10 分钟。
4. 小心吸取上层水相(无色)加入到新试管中,同时计算所吸取的水相体积。不必过多吸取,防止吸入dna和蛋白杂质(中间层,白色)。
5. 加入所吸取水相等体积预冷的---淳,盖紧管盖,轻轻摇匀。
6. 室温静置10 分钟,待rna 充分沉淀(为减少rna 降解,此步骤可省略)。
7. 4℃ 10,000g 离心10 分钟。
8. 将上清弃除(注意别丢弃沉淀),每管加入0.2体积75%---润洗,盖紧管盖,轻轻晃动试管,以去除残留的---淳和盐份。4℃ 7,500g 离心5 分钟。
9. 将上清弃除(注意别丢弃沉淀),打开管盖,将rna 沉淀干燥(室温挥发或真空干燥)。注意rna 沉淀不可完全干燥,叶绿素a研磨仪多少钱,否则难以溶解。
10. 将rna 沉淀溶解于适量的无rnase 水中。如果rna 沉淀溶解不完全,将使od260/od280≤1.6。此rna 溶液可用于进一步实验,或者-70℃保存。
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